現在は、メタ16S/18Ｓ解析用キットをご用意しております。シンプルなワークフローにより得られる分子バーコード付きのライブラリは、たとえば16Sまたは18S ribosomal RNA geneの可変領域全長を疑似ロングリードとして取り扱うことを可能にします。分子バーコード（UMI）を利用しPCR増幅バイアスをキャンセルすることで、シークエンスエラー率を0.005%以下に抑えます。間違って新種と判断されるリスクを減らし、精度の高い分類結果を提供することができる画期的な方法です。

2サイクルのBarcode Assignment PCRにより、目的サイトの5’にバーコードを付加します。末端がバーコードでラベルされた、沢山の分子ができあがります。※バーコード（Loop BC）はサンプル特異的バーコードと分子バーコード（UMI）から成ります。

バーコードを持つ分子の全長を、PCRにより増幅します。

1キットあたり最大24サンプルの、分子バーコード（UMI）ラベル化された分子を混合し、以降の工程はシングルチューブで行います。

分子の末端に付加したバーコード配列を、copy & pasteのようにして増やしていきます。このバーコードの頒布は同一分子内のみでしか起こらないのが特徴です。

バーコードを含む一分子を、ランダムに断片化します。その後、インサートの5’端にバーコードを持つようにライブラリの形を整えます。

長さ600bp程度のライブラリには20種のi7を持たせることができ、最大で480-plexの実験デザインが可能です。

シークエンスは150bpあるいは300bpのペアエンド解析を行ってください。24-plexで3%以上のPhiXの使用が推奨されています。

■デザインとパフォーマンス

本キットは16S ribosomal RNA geneの可変領域全長を検出対象にすることができるという点で優れています。一分子疑似ロングリード解析で得られたリードの96%が、V1-V9領域をスパンできていました。測定領域が大きければ、それだけ異なる塩基の数が多くなるので、データ解像度を上げることが有利になります。

一般的にショートリードで限られた領域（V3-V4）を見るだけでは、属レベルまで同定することができるのは50-70%程度です。しかし本キットによる一分子疑似ロングリード解析で全長可変領域（V1-V9）を読むと、99%以上で属の同定が可能でした。90%以上は種の同定にまで至りました。（メタゲノミクス研究における標準品：ZymoBioMics Microbial Community Standardを用いたモデル実験、 One Codex社によるデータ提供）

あらかじめ含有量のわかっているモデルサンプルを用いた実験を行いました。往々にしてPCR増幅によるバイアスは存在の多い種を際立たせ、少ない種を見えなくさせますが、分子バーコードを利用すれば実態に即した種の解析が可能となります。本キットを使えば、理論値と実測値との誤差がほとんど無く、そして0.02%といった非常に存在比の少ないものも、測定可能でした。

4サンプルを2つの別のキットで測定したところ、結果はよく一致していました。本キットは再現性が高く、複数回に分けて実験を行う場合にも、安心してお使いいただけます。

■デザインとパフォーマンス

本キットではターゲットの全長を検出対象にすることができるという点で優れています。土壌サンプルを測定したところ、合成ロングリードでは確かに2,500bpあたりの領域を読むことができていました。現状のショートリードによるアプローチよりも楽に、多くの情報を得ることができます。