フローサイトメーターCytek® Northern Lights

Northern Lightsについて

Cytek Northern Lightsは最大3レーザー搭載可能ながら、従来の常識を超えたマルチカラー実験を可能とするフローサイトメーターです。
Cytek Northern Lightsには姉妹機であるCytek Auroraと同様の画期的な技術を　搭載しています。本システムの光学設計とアンミキシングアルゴリズムは、研究者に驚くほどの柔軟性を与え、各アプリケーションのために、蛍光色素の幅広く新たな組み合わせを使用可能とします。最先端の光学系と低ノイズエレクトロニクスにより、優れた感度と分解能を実現しています。フラットトップレーザービームプロファイルと独自に設計された流体経路を組み合わせることで、高いサンプルフローレートでも優れた性能を発揮します。
本システムは1～3レーザーながら複雑なパネルを用いた実験を可能とします。
SpectroFlo®ソフトウェアは直感的な操作で、様々なアプリケーションのQCからデータ解析までを簡単に実行できます。
Cytekのチームはより多くの科学者にフルスペクトルサイトメトリーの利点をもたらす装置を提供します。

微小粒子の検出

Northern Lightsは、通常ははるかに高額なシステムでのみ使用可能な機能を、革新的な技術により使用可能となっています。 100mWの405nmレーザー搭載システム（構成によっては非搭載）では、高感度のバイオレットサイドスキャッター検出器を搭載しており、100nmに近いサイズの粒子を分析することができます。Northern Lightsは、様々な微小粒子アプリケーションへの扉を開きます。

ViroFlowの例

外被糖タンパク質にsuperfolder GFP (sfGFP)を発現するように遺伝子操作したマウス白血病ウイルス (MLV-124 nm ±14 nm) を測定した例です。

A）Bfferのみ
B）MLV with no sfGFP (MV-M-Zero) C）MLV with sfGFP (MV-M-sfGFP)
C）MLV with sfGFP (MV-M-sfGFP)

すべてのサンプルは3レーザーAuroraで測定し、violet SSC でスレッシュホールドを掛けています。
ViroFlow Technologies (www.viroflowtechnologies.com)が供給するウイルスを使用しました。
データ解析にはDe Novo™ Software社製FCS Express 6を用いました。

自家蛍光の差分

ソフトウェアの自家蛍光抽出ツールは、高い自家蛍光を持つサンプルを含む困難なアプリケーションに新たなレベルの分解能をもたらします。

PrimeFlow™ RNA Assayの例

ヒトU937細胞を用いたPrimeFlow™ RNAアッセイを実施しました。 Alexa Fluor® 488によりラベリングしたHMBS mRNAをNorthern Lightsで測定し、低発現（10コピー以下/細胞）の検出性をSpectroFlo®ソフトウェアによる自家蛍光差分無しと有りのデータ間で比較しました。

ブルーレーザー励起 9色パネル

スペクトルサイトメーターによって、さまざま可能性の扉が開かれます。Northern Lightsを使用することで１もしくは２レーザーという少ないレーザー数のフローサイトメーターで複雑なマルチカラー実験が可能となります。 独自の光学システムにより、解像度を犠牲にすることなく、蛍光波長がオーバーラップした色素の併用が可能となり、色素選択の柔軟性が向上します。フィルターを組み替えることなく、すべてのアプリケーションに同一の構成が使用できるため実験セットアップの時間を節約し、実験エラーの可能性を最小限に抑えます。

末梢血単核細胞（PBMC）を解凍、染色、洗浄し、1レーザーNorthern Lightnsで測定しました。このブルーレーザー励起９色色素パネルでは、単球およびいくつかのCD4陽性T細胞およびCD8陽性T 細胞サブセットが容易に同定できました。 このアッセイで測定したマーカーおよび蛍光色素を以下の表に例示します。

3レーザーで24色パネル

Northern Lightsの光学設計とSpectroFlo®ソフトウェアのUnmix機能を組み合わせることで、幅広い蛍光色素の選択、パネルの作成、フィルターの交換を必要としない簡単な機器セットアップが可能になります。3レーザー構成のNorthern Lightsは、幅広いアプリケーションに適したマルチパラメトリックデータを提供します。ヒト末梢血中の循環細胞サブセットを同定するために設計された24色パネル中のマーカーおよび蛍光色素を以下の表に例示します。

24色パネルにはオーバーラップする蛍光色素が数多く含まれています

• Violet Excited Dyes Emission Spectra
• Blue Excited Dyes Emission Spectra
• Red Excited Dyes Emission Spectra

APC/Fire™ and PE/Dazzle™はBioLegend,Inc.所有の商標です。
Brilliant Violet™ はSirigen Group Ltd.の商標です。
BD Horizon™ とBrilliant Blue (BB) はBD Biosciencesの商標です。
Alexa Fluor®、 eFluor®、Super BrightはThermo Fisher Scientificの商標です。
Cy® and CyDye®はGE Healthcareの登録商標です。

Allophycocyanin (APC) conjugates: US Patent No. 5,714,386
PE-Cy7: US Patent Number 4,542,104.
APC-Cy7: US Patent Number 5,714,386.
商標および登録商標はそれぞれの所有者に帰属します。

A New Reality: 3レーザー、24色による高解像度解析

3レーザー、24色による高解像度解析

蛍光タンパク質、近似波⻑色素の識別

いくつかの蛍光タンパク質や蛍光色素の組み合わせでは蛍光スペクトラムのオーバーラップが大きいため（Figure 1, 4）、従来のフローサイトメトリー技術では識別が困難です。Northern Lightsは全レーザーの全蛍光波⻑スペクトラムシグネチャーを利用することでこの問題を解消し、共発現を含む集団が識別可能になります（Figure 2, 3, 5, 6）。

例1: GFP、YFP、CFPとDsRed

Figure 3 : Sp2/0細胞をGFP、YFP、CFP、DsRedでトランスフェクション（単独もしくは複数)し、Northern Lightsで測定したプロット（FSC vs SSCゲート済み）。それぞれの集団が明確に特定可能なことがわかります。

例2: Qdot 705とBV711

Figure 6 : 健常者の全血サンプルを染色、溶血洗浄しNorthern Lightsで解析をした例。CD56BV711とCD8 Qdot 705共発現しているNK細胞サブセットとNK T細胞サブセットを識別できていることがわかります。

プレートローダー

AMS

実験目的に最適化したプリセット、あるいはカスタマイズした条件設定が可能です。AMSはNorthern Lightsに組み込み、シームレスに実験ワークフローを実⾏できるようにデザインされており、使い易くかつ低キャリーオーバー、低デッドボリュームな実験環境と提供します。

ソフトウェア

SpectroFlo®はQCから解析までを簡単に実⾏出来る直感的なワークフローツールを備えております。

Acquisition

• Experiment Menu
• Worksheet Menu
• Fluidics Menu
• Plate Calibration

実験ワークフロー

Acquisitionメニューから3ステップで新たな実験を開始可能です。

仕様